Introducción: Blastocystis spp. es un protozoario unicelular anaeróbico, cosmopolita, considerado un protozoario de patogenicidad discutida. Hay un gran debate en relación a si es comensal intestinal o un verdadero patógeno. Presenta gran diversidad genética. Se describe una asociación entre subtipo (ST) genéticos encontrados y la presentación de síntomas en pacientes. Objetivos: poner a punto el diagnóstico molecular de Blastocystis spp. en muestras fecales y determinar los genotipos de Blastocystis spp. que circulan en Uruguay y su posible asociación con parámetros clínicos Metodología: se pone a punto la extracción de ADN total a partir de muestras fecales, y la reacción en cadena de polimerasa (PCR) para la identificación de Blastocystis spp. Las muestras de materia fecal fueron obtenidas en el marco de otros proyectos PAIE para las cuales se cuenta con consentimiento informado. Se extrae el ADN, mediante el kit comercial QIAamp™ DNA Stool Minikit (Qiagen, Hilden, Germany). La detección de Blastocystis spp. por PCR se basa en la amplificación de la subunidad pequeña de su ADN ribosomal (ADNr SSU), utilizando dos pares de primers específicos. La tipificación se lleva a cabo a través de la secuenciación por Sanger de los productos amplificados por PCR, y utilizando Blast y las secuencias depositadas en NCBI correspondientes a cada subtipo genético como referencia. Resultados: Se extrae ADN total de 29 muestras, todas positivas para Blastocystis spp. por microscopía. De estas se detectó ADN de Blastocystis spp. en 14. 8 de estas muestras aún están en procesamiento y no conocemos, se secuencia 3 muestras arrojaron una secuencia inespecífica, presumiblemente por su baja concentración. En las 3 muestras restantes, se detectaron 3 subtipos genéticos distintos: subtipo 1, subtipo 2 y subtipo 6. Discusión: Se logra poner a punto el diagnóstico molecular de Blastocystis spp, así como la extracción de ADN total de materias fecales. Se sortean impedimentos técnicos como la presencia de inhibidores y la pobre conservación de la integridad de las muestras procesadas. Se reporta por primera vez en Uruguay los subtipos que circulan en el país. Se distinguen 3 subtipos distintos: ST1, ST2 y ST6. Se destaca la importancia de seguir trabajando con el agente a fin de conocer la prevalencia de estos. No se logra realizar una asociación entre subtipo y síntomas ya que el número de muestras procesadas hasta el momento es demasiado bajo para realizar inferencias.
