CRISPR-Cas9 es una tecnología de edición genómica descubierta mediante el estudio de los sistemas de inmunidad adaptativa de procariotas frente a infecciones virales y ADNs foráneos. Esta tecnología ofrece una técnica simple, rápida y versátil que permite la generación de cortes doble hebra en zonas específicas del ADN y la posterior edición a nivel genómico en una variedad de células eucariotas. Dado que la especificidad del corte de la nucleasa Cas9 está determinada por la secuencia del ARN guía (sgRNA), el proceso se puede dirigir a prácticamente cualquier locus genómico mediante el diseño específico del sgRNA. El primer paso para implementar esta herramienta, es contar con la proteína Cas9. Por eso, en este proyecto nos proponemos expresarla y purificarla a partir de un sistema bacteriano utilizando un plásmido comercial de expresión. Además se evaluará su actividad de manera in vitro a partir del diseño experimental publicado por Burle-Caldas en 2018 para el gen gp72 de Trypanosoma cruzi. Finalmente, mediante análisis informáticos se pretende seleccionar genes de T. cruzi de interés para el grupo, y diseñar los sgRNA respectivos para utilizar el sistema CRISPR-Cas9 en dicho modelo. Se obtuvo la Cas9 a una cantidad y pureza satisfactoria para el correcto desempeño del trabajo. Además, se evidenció el correcto funcionamiento de la Cas9 producida de forma recombinante, mostrando un corte doble hebra eficiente en la región esperada para el gen en cuestión. Este trabajo proporciona una plataforma para introducir en el futuro, el sistema CRISPR/Cas9 en líneas de investigación del laboratorio.
Servicio: Facultad de Ciencias UdelaR. Nombre de los integrantes del equipo: Lucia Colantuono, Selene Píriz, Martín Rivara y Lucas Inchausti. Nombre del docente orientador: Pablo Smircich y Santiago Chávez.
